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四大經典核酸純化方法

更新時間:2016-03-31       點擊次數:2484
  核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎,核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的zui重要因素,也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。目前常見的核酸純化方法有PC抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法,這幾種方法各有其優(yōu)勢和劣勢。
 
  一、PC抽提法
 
  PC抽提是去除蛋白質有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質不會被一次去除,必須靠多次抽提,方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質難以*去除,以及基因組DNA會斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是,利用酸性酚可以部分去除DNA的特點,在RNA抽提時獲得DNA殘留極少的RNA。不過有一點要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質之前,是不能使用PC抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢是成本低廉,對實驗條件要求較低,對于經費緊張的實驗室較為實用。
 
  二、高鹽沉淀法
 
  高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法,同樣也是一個非常不錯的方法。與PC抽提方法相比,除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點外,該方法幾乎克服了PC抽提的所有缺點。更快、更輕松的去除蛋白質所可以用于大規(guī)模抽提,但其不足之處是純度(蛋白質殘留)不夠穩(wěn)定,蛋白質的沉淀效率在4℃會更好一些。
 
  三、離心柱法
 
  離心柱純化法,是目前試劑盒提取廣泛應用的方法。其zui大特點是受人為操作因素影響小,純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進入另外一個離心管中,與含有核酸的柱子*是分開的,所以洗滌更*。其致命弱點是樣品過量,提取效率較低,且需要反復離心,操作復雜,成本也較高。
 
  四、生物磁珠法
 
  生物磁珠法是將純化介質包被在納米級生物磁珠表面,通過介質對核酸的吸附,在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動,從而達到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比,生物磁珠法具有很多*的優(yōu)勢,如:
 
  ①提取靈敏度高(微量材料即可提?。?/div>
 
 ?、诩兓兌雀撸?與蛋白鹽等雜質分離)
 
  ③提取產量高(每mg磁珠能吸附500ugDNA)
 
 ?、芊蛛x快速(磁分離只需幾秒)
 
  ⑤自動化操作(加液后*機器自動化操作,無需人力,提率)
 
 ?、薷咄刻崛。赏瑫r完成幾十甚至幾百個樣品的提?。?/div>
 
 ?、邿o毒無害無污染(試劑中不含任何氯仿、酚等,操作環(huán)境更加安全)
 
  生物磁珠法純化核酸的普及需要磁分離裝置的同步跟進,如磁力架或自動提取儀。目前,各類磁分離裝置主要來自于進口,不僅價格較高,而且售后服務質量也偏低。因此,向大家推薦洛陽惠爾納米科技園自主研發(fā)的磁力架、磁力筆及全自動核酸提取儀,該裝置通過技術創(chuàng)新,大大提高了靈活機動性,在操作上更加方便快捷,有效解決了磁分離裝置對磁珠法核酸提取的限制,受到科研工作者的*。
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